Использование хитозана различного происхождения в медицине

Хитозан широко используется во всех сферах деятельности человека. Его получают из животных, насекомых и растений, в составе которых есть хитин, за счет химической очистки последнего. Наиболее востребовано сырье животного происхождения, а наиболее перспективно — из насекомых. Основные положения. Хитозан широко применяется в медицине: в нутрициологии, хирургии, гематологии, стоматологии и онкологии. Он обладает биосовместимостью, биорезорбируемостью, нетоксичностью, гемостатичностью, пластичностью, адгезивностью, имеетантибактериальные свойства. За счет возможности изменять химическую формулу хитозана, его молекулярнуюмассу и заряд, комбинировать его с различными веществами можно найти новые области применения этого вещества, более дешевые пути его добычи. Детоксикационные, сорбционные, гиполипидемические свойства хитозана востребованы в нутрициологии и гастроэнтерологии. Влияние хитозана на различные фазы регенерации, антикоагулянтные свойства используются в хирургии. Остеоиндуктивные эффекты соединений хитозана применяются в стоматологии и травматологии. Гемостатические и антибактериальные, противопухолевые и радиопротективные свойства хитозана являются основными научными направлениями в неотложной хирургии и онкологии соответственно. Заключение. Широкое применение хитозана во всех сферах деятельности человека, особенно в медицине, делает его востребованным и перспективным веществом. Для того, чтобы расширить производство различных веществ на основе хитозана, необходимо найти новые более дешевые средства для получения хитозана из хитина, наладить маршрутизацию от начального сырья до конечного вещества, разработать российские независимые аналоги лекарственных форм хитозана.

1. Петрович Ю.А., Григорьянц Л.А., Гурин А.Н., Гурин Н.А. Хитозан: структура и свойства. Использование в медицине. Стоматология. 2008;87(4):72–78.

2. Быкова В., Немцов В.С. Сырьевые источники и способы получения хитина и хитозана. Хитин и хитозан. Получение, свойства и применение. Под ред. К.Г. Скрябина, Г.А. Вихревой, В.П. Варламова. Москва. Изд. «Наука», 2006;7–23.

3. RodwellMurray R.K., Granner D.K., Mayes P.A., Victor W. Harper’s Biochemistry 25th ed. Stamford, 2000;927.

4. Grishin A.A., Zorina N.V., Lutsky V.I. Chitin and chitozan: chemistry, biological activity, application. University Bulletin. Applied Chemistry and Biotechnology. Irkutsk. 2014;7(1):29–34.

5. Mukatova M.D., Kirichko N.A., Romanenkova E.N. Qualitative characteristics of chitin and chitosan obtained from the shell of waste containing crayfish waste. Vestnik MGTU. Murmansk, 2015;18(4):641–646.

6. Kargin V.S., Pyatigorskaya N.V., Brkich G.E. Various properties of chitosan and the possibility of its use in the medical field. Interuniversity Scientific Congress “Higher School: Scientific Research”. Moscow. 2020:72–78.

7. Horst M.N., Walker A.N., Klar E. The pathway of crustacean chitin synthesis, the Crustacean Integument: Morphology and Biochemistry. Eds. Horst M.N., Free man J.A. CRC: Boca Raton, USA. 1993:113–149.

8. Немцев С.В. Комплексная технология хитина и хитозана из панциря ракообразных. Москва: ВНИРО, 2006;134.

9. Немцев С.В., Зуева О.Ю., Хисматуллин М.Р., Албулов А.И., Варламов В.П. Получение хитина и хитозана из медоносных пчел. Прикладная биохимия и микробиология. 2006;40:46‒50.

10. Tereshina, V.M., Memorskaya, A.S., Feofilova, E.P., Nemtsev, D.V., Kozlov, V.M. Isolation of polysaccharide complexes from mycelial fungi and determination of their deacetylation degree. Microbiology. 1997;66:84‒89.

11. Ruiz Herrera J., Gonzalez Prieto J.M., Ruiz Medrano R. Evolution and phylogenetic relationships of chitin synthases from yeasts and fungi. FEMS Yeast Research. 2002;1:247–256. DOI: 10.1111/j.1567-1364.2002.tb00042.x

12. Tsigos I., Nathalie Z., Aggeliki M., Alain D., Bouriotis V. Mode of action of chitin deacetylase from Mucor rouxii on N-acetylchitooligosaccharides. European Journal of Biochemistry. 1999;261:1–9. DOI: 10.1046/j.1432-1327.1999.00311.x

13. Феофилова Е.П. Ключевая роль хитина в образовании клеточной стенки грибов, Хитин и хитозан. Получение, свойства и применение. Под ред. Скрябина К.Г., Вихоревой Г.А., Варламова В.П. Москва. Наука. 2002;79–99.

14. Феофилова Е.П. Хитин грибов: распространение, биосинтез, физикохимические свойства и перспектива использования. Хитин и хитозан. Получение, свойства и применение. Под ред. Скрябина К.Г., Вихоревой Г.А., Варламова В.П. М. Наука. 2002;100–111.

15. Mysyakina I.S., Bokareva D.A., Usov A.I., Feofilova E.P. Differences in the carbohydrate composition between the yeastlike and mycelial cells of Mucor hiemalis. Microbiology. 2012;81:405‒408. DOI: 10.1134/S0026261712040133

16. Karimi K., Zamani A. Mucor indicus: biology and industrial application perspectives: a review. Biotechnology Advances. 2013;31:466–481. DOI: 10.1016/j.biotechadv.2013.01.009

17. Варламов В.П. Хитин/хитозан и его производные: фундаментальные и прикладные аспекты. Под ред. В.П. Варламова, А.В. Ильина, Б.Ц. Шагдарова. Успехи биологической химии. Москва. 2020;60:317–368.

18. Осовская И.И. Дополнительные главы технологии полимерных материалов. Физико-химические свойства хитина, хитозана и волокон на их основе: учеб. пособие. Под ред. И.И. Осовской. Санкт-Петербург. ВШТЭ СПбГУПТД; 2021:80. ISBN 987-5-91646-263-0.

19. Солдатова С.Ю. Разработка технологии получения хитозана из панцирьсодержащего сырья. Вестник Нижневартовского государственного университета. 2015;1:48–56.

20. Быков В.П., Сныткин И.И., Быкова В.М., Кривошеина Л.И., Недосекова Т.М., Новиков А.В., Панов К.Н., Фурман Д.И. Всероссийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии, патентообладатели. Способ получения хитозана из ракообразных. Российская Федерация Патент RU 2116733. 10 июля 1998 г.

21. Федосов П.А. Хитозан как полимер будущего и перспективы его применения в медицине. Электронный научный журнал «Аpriori». Cерия: естественные и технические науки». Воронеж, 2014;4:1–7. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/hitozan-kak-polimer-buduschegoi-perspektivy-ego-primeneniya-v-meditsine/viewer

22. Козырева Е.В., Абрамов А.Ю., Шиповская А.Б. Особенности физикохимических свойств растворов хитозана. Известия Саратовского университета. Новая серия. Серия: Химия. Биология. Экология. 2011;11(2):25–31.

23. Никитенко П., Хрустицкая Л. Хитозан — полимер будущего. Наука и инновация. 2013;9(127):14–17.

24. Сливкин Д.А., Лапенко В.Л., Сафонова О.А., Суслина С.Н., Беленова А.С. Хитозан для фармации и медицины. Вестник Воронежского государственного университета. Серия: Химия. Биология. Фармация. 2011;2:214–232.

25. Албулов А.И., Фролова М.А., Буханцев А.В., Быкова В.М., Немцев С.В. Хитозансодержащие биологически активные добавки к пище в рационализации питания населения. Рыбпром: технологии и оборудование для переработки водных биоресурсов. 2010;2:25–28.

26. Гладышев Д.Ю. Строение и фракционный состав карбоксиметилового эфира хитозана. Высокомолекулярные соединения. 1990;32Б(7):503–505.

27. Камская В.Е. Хитозан: структура, свойства и использование. Научное обозрение. Биологические науки. 2016;6:36–42. URL: https://science-biology.ru/ru/article/view?id=1020

28. Большаков И.Н., Насибов С.М., Куклин Е.Ю. Использование хитозана и его продуктов при воспалительных заболеваниях желудочно-кишечного тракта. Хитин и хитозан. Получение, свойства и применение. Под ред. К.Г. Скрябина, Г.А. Вихревой, В.П. Варламова. Москва. Изд. «Наука», 2006:7–23.

29. Tarsi R., Muzzarelli R., Guzman C., Pruzzo C. Inhibition of Streptococus mutans. Adsorption of hydroxyapatite by low-molecular weight chitosans. J. Dent. Research. 1997;76(2):665–672. DOI: 10.1177/00220345970760020701

30. Аbilova G., Makhayeva, D., Irmukhametova, G., Khutoryanskiy, V. Chitosan based hydrogels and their use in medicine. Chemical Bulletin of Kazakh National University. 2020;97(2):16–28. DOI: 10.15328/cb1100

31. Tyliszczak B., Drabczyk A., Kudłacik-Kramarczyk S., Bia likWąs K., Kijkowska R., Sobczak-Kupiec A. Preparation and cytotoxicity of chitosan-based hydrogels modified with silver nanoparticles. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 2017;160:325–330. DOI: 10.1016/j.colsurfb.2017.09.044

32. Deepachitra R., Pujitha Lakshmi R., Sivaranjani K., Helan Chandra J., Sastry T.P. Nanoparticles embedded biomaterials in wound treatment: A review. Journal of Chemical and Pharmaceutical Sciences. 2015;8(2):324–329.

33. Горшенин Д.С., Жернов Ю.В., Кривцов Г.Г., Хаитов М.Р. Применение хитозана и его производных в иммунотерапии злокачественных новообразований. Иммунология. 2020;41(5): 470-478. DOI: 10.33029/0206-4952-2020-41-5-470-478

34. Sun B., Yu S., Zhao D., Guo S., Wang X., Zhao K. Polysaccharides as vaccine adjuvants. Vaccine. 2018;36(35):5226–34. DOI: 10.1016/j.vaccine.2018.07.040

35. Vasconcelos D.P., de Torre-Minguela C., Gomez A.I. 3D chitosan scaffolds impair NLRP3 inflammasome response in macrophages. Acta Biomater. 2019;91:123–34. DOI: 10.1016/j.actbio.2019.04.035

36. Fong D., Gregoire-Gelinas P., Cheng A.P. Lysosomal rupture induced by structurally distinct chitosans either promotes a type 1 IFN response or activates the inflammasome in macrophages. Biomaterials. 2017;129:127–38. DOI: 10.1016/j.biomaterials.2017.03.022

37. Pogorielov M. V., Sikora V.Z. Chitosan as a Hemostatic Agent: Current State. European Journal of Medicine. Series B. 2015;1(2):24–33. DOI: 10.13187/ejm.s.b.2015.2.24

38. Huang Y., Feng L., Zhang Y., He L., Wang C., Xu J., Wu J., Kirk T.B., Guo R., Xue W. Hemostasis mechanism and applications of N-alkylated chitosan sponge. Polymers for Advanced Technologies. 2017;9(28):1107–1114. DOI: 10.3390/md16080273

39. Будко Е.В., Черникова Д.А., Ямпольский Л.М., Яцюк В.Я. Местные гемостатические средства и пути их совершенствования. Российский медикобиологический вестник имени академика И.П. Павлова. 2019;27(2):274-285. DOI: 10.23888/PAVLOVJ2019272274-285

40. Феськов А.Э., Соколов А.С., Солошенко С.В. Новый гемостатический бинт на основе естественного биополимера хитозана. Харьковская медицинская академия постдипломного образования. Медицина неотложных состояний. 2017;2(81):95–98.

41. Ляпина Л.А., Григорьева М.Е., Ляпин Г.Ю., Оберган Т.Ю., Шубина Т.А. Агрегационные эффекты хитозана в крови. Norwegian Journal of development of the International Science. 2021;61:13–16

42. Липатов В.А., Бордунова М.А., Панов А.А., Денисов А.А. К вопросу классификации местных кровоостанавливающих средств. Innova. 2022;4(29):38–41.

43. Sudheesh Kumar P.T., Lakshmanan V.K., Anilkumar T.V., Ramya C., Reshmi P. Flexible and microporous chitosan hydrogel/ nano ZnO composite bandages for wound dressing: In vitro and in vivo evaluation. ACS Applied Materials and Interfaces. 2012;4(5):2618–2629. DOI: 10.1021/am300292v

44. Hu Z., Zhang D.-Y., Lu S.-T., Li P.-W., Li S.-D. Chitosan-Based Composite Materials for Prospective Hemostatic Applications. Marine Drugs. 2018;8(16):273. DOI: 10.3390/md16080273

45. Kumar S.M.P. Local hemostatic agents in the management of bleeding in oral surgery. Asian Journal Pharmaceutical and Medical Research. 2016;9 (3):35–41.

46. Будко Е.В., Черникова Д.А., Ямпольский Л.М., Яцюк В.Я. Местные гемостатические средства и пути их совершенствования. Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова. 2019;27(2):274–285. DOI: 10.23888/PAVLOVJ2019272274-285

47. Li Q., Lu F., Zhou G., Yu K., Lu B., Xiao Y., Dai F., Wu D., Lan G. Silver Inlaid with Gold Nanoparticle/Chitosan Wound Dressing Enhances Antibacterial Activity and Porosity, and Promotes Wound Healing. Biomacromolecules. 2017;11(18):3766–3775. DOI: 10.1021/acs.biomac.7b01180

48. Fan L., Yang H., Yang J., Peng M., Hu J. Preparation and characterization of chitosan/gelatin/PVA hydrogel for wound dressings. Carbohydrate Polymers. 2016;146:427–434. DOI: 10.1016/j.carbpol.2016.03.002

49. Hu Z., Zhang D.-Y., Lu S.-T., Li P.-W., Li S.-D. Chitosan-Based Composite Materials for Prospective Hemostatic Applications. Marine Drugs. 2018;8(16):273. DOI: 10.3390/md16080273

50. Siemer S., Lahme S., Altziebler S., Machtens S., Strohmaier W., Wechsel H.-W., Goebell P., Schmeller N., Oberneder R., Stolzenburg J.-U., Becker H., Lüftenegger W., Tetens V., Poppel H. Efficacy and Safety of TachoSil® as Haemostatic Treatment versus Standard Suturing in Kidney Tumour Resection: A Randomised Prospective Study. European Urology. 2007;4(52):1156–1163. DOI: 10.1016/j.eururo.2007.04.027

51. Zhang J., Xue S., Zhu X., Zhao Y., Chen Y., Tong J., Shi X., Du Y., Zhong Z., Ye Q. Emerging chitin nanogels/rectorite nanocomposites for safe and effective hemorrhage control. Journal of Materials Chemistry B. 2019;33(7):5096–5103. DOI: 10.1039/c9tb01019j

52. Sun X., Tang Z., Pan M., Wang Z., Yang H., Liu H. Chitosan/kaolin composite porous microspheres with high hemostatic efficacy. Carbohydrate Polymers. 2017;177:135–143. DOI: 10.1016/j.carbpol.2017.08.131

53. Gudmund Skjå k-Braek, Thorleif Anthonsen, Paul Sandford. Chitin and chitosan. Sources, chemistry, biochemistry, physical properties and applications. London, New York, 1989:835.

54. Xi Lu., Prudhommeaux F., Meunier A., Sedel L., Guillemin G. Effect of chitosan on rat knee cartilages. Biomaterials. 1999;20:1937–1944. DOI: 10.1016/s0142-9612(99)00097-6

55. Suh I.K.F., Matthew H. Application of chitosan-based polysaccharide biomaterials in cartilage tissue engineering: a review. Biomaterials. 2000;21:2589–2598. DOI: 10.1016/s0142-9612(00)00126-5

56. Anisha B.S., Biswas R., Chennazhi K.P., Jayakumar R. Chitosan-hyaluronic acid/nano silver composite sponges for drug resistant bacteria infected diabetic wounds. International Journal of Biological Macromolecules. 2013;62:310–320. DOI: 10.1016/j.ijbiomac.2013.09.011

57. Ishihara M., Ono K., Sato M., Nakanishi K., Saito Y., Yura H., Matsui T., Hattori H., Fujita M., Kikuchi M., Kurita A. Acceleration of wound contraction and healing with a photocrosslinkable chitosan hydrogel. Wound Repair and Regeneration. 2001;9(6):513–521. DOI: 10.1046/j.1524-475x.2001.00513.x

58. Obara K., Ishihara M., Ishizuka T., Fujita M., Ozeki Y., Maehara T., Saito Y., Yura H., Matsui T., Hattori H., Kikuchi M., Kurita A. Photocrosslinkable chitosan hydrogel containing fibroblast growth factor-2 stimulates wound healing in healing-impaired db/db mice. Biomaterials. 2003;24(20):3437–3444. DOI: 10.1016/s0142-9612(03)00220-5

59. Caló E., Barros J.M.S.D., Fernández-Gutiérrez M., San Román J., Ballamy L., Khutoryanskiy V. V. Antimicrobial hydrogels based on autoclaved poly (vinyl alcohol) and poly (methyl vinyl ether-alt-maleic anhydride) mixtures for wound care applications. RSC Advances. 2016;6(60):55211–55219. DOI: 10.1039/C6RA08234C

60. Яхкинд М.И., Таранцева К.Р. Наносистемы для доставки лекарств из носа в мозг. Известия ПГПУ им. В.Г. Белинского. 2012;29:293–300.

61. Muzzarelli R., Biagini G., Pugnaloni A., Filippini O., Baldassarre V., Castaldini С., Rizzoli С. Reconstruction of paradontal tissue with chitosan. Biomaterials. 1989;10(11):598–603. DOI: 10.1016/0142-9612(89)90113-0

62. Костеша Н.Я. Противолучевая активность препаратов хитозана с растительными экстрактами. Под ред. Н.Я. Костеша. Библиотека ВНИРО. 2006:1–3.

63. Bumgardner J.D., Wiser R., Elder S.H., Jouett R. Contact angle, protein adsorption and osteoblast precursor cell attachment to chitosan coatings bonded to titanium. J. Biomater. Sci. Polym. Ed. 2003;14:1401–1409. DOI: 10.1163/156856203322599734

64. Bumgardner J.D., Wiser R., Gerard P.D., Bergin P., Chestnutt B., Marini M., Ramsey V., Elder St.H., Gilbert J.A. Chitosan: potential use as a bioactive coating for orthopaedic and craniofacial/dental implants. J. Biomater. Sci. Polym Ed. 2003;14:423–438. DOI: 10.1163/156856203766652048

65. Wang J., de Boer J., de Groot K. Preparation and characterization of electrodeposited calcium phosphate/chitosan coating on Ti6Al4V plates. J. Dent. Res. 2004;83:296–301. DOI: 10.1177/154405910408300405

66. Wang X., Ma J., Wang Y., He B. Bone repair in radii and tibias of rabbits with phosphorylated chitosan reinforced calcium phosphate cements. Biomaterials. 2002;23:4167–4176. DOI: 10.1016/S0142-9612(02)00153-9

67. Muzzarelli R., Biagini G., Bellardini M., Simonelli L., Castaldini C. and Fratto G. Osteoconduction exerted by methylpyrrolidinone chitosan used in dental surgery. Biomaterials. 1993;14(1):39–43. DOI: 10.1016/0142-9612(93)90073-B

68. Cho B.C., Park J.W., Baik B.S., Kwon I.Ch., Kim I.S. The role of hyaluronic acid, chitosan, and calcium sulfate and their combined effect on early bony consolidation in distraction osteogenesis of a canine model. J. Craniofac. Surg. 2002;13:783–793. DOI: 10.1097/00001665-200211000-00014

69. Kim S.B., Kim Y.J., Yoon T.L., Park S.A. The characteristics of a hydroxyapatite-chitosan-PMMA bone cement. Biomaterials. 2004;25:5715–23. DOI: 10.1016/j.biomaterials.2004.01.022

70. Kawakami T., Antoh M., Hasegawa H., Yamagishi T., Ito M., Eda S. Experimental study on osteoconductive properties of a chitosan-bonded hydroxyapatite self-hardening paste. Biomaterials. 1992;13:759–763. DOI: 10.1016/0142-9612(92)90014-f

71. Xu H.H., Quinn J.B., Takagi S., Chow L.C. Synergistic reinforcement of in situ hardening calcium phosphate composite scaffold for bone tissue engineering. Biomaterials. 2004;25:1029–1037. DOI: 10.1016/s0142-9612(03)00608-2

72. Ito M. In vitro properties of a chitosan-bonded hydroxyapatite bone-filling paste. Biomaterials. 1991;12(1):41–45. DOI: 10.1016/0142-9612(91)90130-3

73. Murugan R., Ramakrishna R. Bioresorbable composite bone paste using polysaccharide based nanohydroxyapatite. Biomaterials. 2004;25:3829–3835. DOI: 10.1016/j.biomaterials.2003.10.016

74. Tarsi R., Muzzarelli R. Guzman C, Pruzzo C. Inhibition of Streptococus mutans. Adsorption of hydroxyapatite by low-molecular weight chitosans. J. Dent. Research. 1997;76(2):665–672. DOI: 10.1177/00220345970760020701

75. Anraku M., Fujii T., Furutani N., Kadowaki D., Maruyama T., Otagiri M., Gebicki J.M., Tomida H. Antioxidant effects of a dietary supplement: Reduction of indices of oxidative stress in normal subjects by water soluble chitosan. Food and Chemical Toxicology. 2009;47:104–109. DOI: 10.1016/j.fct.2008.10.015

76. Chang S.H., Wu C.H., Tsai G.J. Effects of chitosan molecular weight on its antioxidant and antimutagenic properties. Carbohydrate Polymers. 2018;181:1026–1032. DOI: 10.1016/j.carbpol.2017.11.047

77. Tomida H., Fujii T., Furutani N., Michihara A., Yasufuku T., Akasaki, K., Maruyama, T., Otagiri, M., Gebicki, J.M., Anraku, M. Antioxidant properties of some different molecular weight chitosans. Carbohydrate Research. 2009;344:1690–1696. DOI: 10.1016/j.carres.2009.05.006

78. Zou P., Yang X., Wang J., Li Y., Yu H., Zhang Y., Liu G. Advances in characterisation and biological activities of chitosan and chitosan oligosaccharides. Food Chemistry. 2016;190:1174–1181. DOI: 10.1016/j.foodchem.2015.06.076

79. Xia W., Liu P., Zhang J., Chen J. Biological activities of chitosan and chitooligosaccharides. Food Hydrocolloids. 2011;25:170–179. DOI: 10.1016/j.foodhyd.2010.03.003

80. Liu H.T., Li W.M., Xu G., Li X.Y., Bai X.F., Wei P., Yu C., Du Y.G. Chitosan oligosaccharides attenuate hydrogen peroxideinduced stress injury in human umbilical vein endothelial cells. Pharmacologi cal Research. 2009;59:167–175. DOI: 10.1016/j.phrs.2008.12.001

81. Li K., Xing R., Liu S., Li R., Qin Y., Meng X., Li P. Separation of chito oligomers with several degrees of polymerization and study of their antioxidant activity. Carbohydrate Polymers. 2012;88:896–903. DOI: 10.1016/j.carbpol.2012.01.033

82. Hu Q., Luo Y. Polyphenol chitosan conjugates: Synthesis, characterization, and applications. Carbohydrate Polymers. 2016;151:624–639. DOI: 10.1016/j.carbpol.2016.05.109

83. Azuma K., Osaki T., Minami S., Okamoto Y. Anticancer and anti-inflammatory properties of chitin and chitosan oligosaccharides. J. Funct. Biomater. 2015; 6(1):33–49. DOI: 10.3390/jfb6010033

84. Huang R., Mendis E., Rajapakse N., Kim S.-K. Strong electronic charge as an important factor for anticancer activity of chitooligosaccharides (COS). Life Sci. 2006;78(20):2399–2408. DOI: 10.1016/j.lfs.2005.09.039

85. Xu W., Jiang, C., Kong X., Liang Y., Rong M., Liu W. Chitooligosaccharides and N-acetyl-D-glucosamine stimulate peripheral blood mononuclear cell-mediated antitumor immune responses. Mol. Med. Rep. 2012;6(2):385–390. DOI: 10.3892/mmr.2012.918

86. Janes K.A., Fresneau M.P., Marazuela A. Chitosan nanoparticles as delivery systems for doxorubicin. J. Control Released. 2001;73(2–3):255–267. DOI: 10.1016/s0168-3659(01)00294-2

87. Shanmugsundaram N., Ravichandran P., Reddy P.N., Ramamurty N., Pal S., Rao K.P. Collagen-chitosan polymeric scaffold for the in vitro culture of human epidermoid carcinoma cells. Biomaterials. 2001;2:1943–1951. DOI: 10.1016/s0142-9612(00)00220-9